Das Einbringen von fremder DNA in Zellen höherer Organismen ist für die Beantwortung vieler biologischer oder medizinischer Fragen eine unerlässliche Prozedur. In diesem Einführungskurs sollen die gebräuchlichsten Strategien und Methoden der DNA-Transfektion von menschlichen Zellen vorgestellt werden.
Berücksichtigt werden verschiedene Konzepte der Transfektionstechnik:
- transiente und stabile Transfektion
- Expression von Reportergenen
- Expression von Fusionsgenen mit dem Grün-Fluoreszierenden-Protein (GFP)
- RNA-Interferenz: siRNA-Transfektion
- Transfektion verschiedener Nukleinsäuren (Co-Transfektionen)
- Peptidtransfektion
- Optimierung von Transfektionen
Auf der methodischen Seite ist die Durchführung von
- Nucleofection
- Calciumphosphat-Transfektion
- Lipofektion
- Polyethylenimin (PEI)-Transfektion
vorgesehen.
Die Transfektionen werden mit folgenden Zelltypen durchgeführt:
- adhärent wachsende Zellen
- in Suspension wachsende Zellen
- menschliche Primärzellen
- menschliche adulte Stammzellen
- Zelllinien
Weiterhin werden im Kurs einige wichtige Methoden der Analyse transfizierter Zellen vorgestellt. Dazu gehören:
- Reportergen-Assays
- Zellvitalitätsassays
- Fluoreszenzmikroskopie
- Durchflusszytometrie (FACS)