Die Flüssigchromatographie ist die Trenntechnik der Wahl bei der qualitativen und quantitativen Untersuchung von Molekülen aller Art. Die Vielfalt der Trennverfahren ermöglicht die Untersuchung von großen Biomolekülen (z.B. Nukleinsäuren, Peptide, Lipide und Kohlenhydrate) wie auch von niedermolekularen organischen Molekülen (z. B. Arzneistoffe, Drogen, Vitamine, Alkaloide, Hormone, Lebensmittel- / Kosmetikadditive und umweltbelastende Stoffe). Die Automatisierung der Flüssigchromatographie in Form der Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) und die verschiedenen Säulenmaterialien führen zur Lösung bei vielen Trennproblemen. Zielmoleküle werden nach der Trennung von anderen Stoffen mit verschiedenen hochempfindlichen Nachweistechniken erkannt und gemessen.
Dieser Laborkurs vermittelt dem Einsteiger die Grundlagen der HPLC und dem Routineanwender die Hintergründe seiner täglichen Arbeit. Der Kurs soll die Teilnehmer in die Lage versetzen,
- Grundlagen und praktische Aspekte der HPLC-Trennung und HPLC-Apparatur zu verstehen
- eine Trennung selbständig durchzuführen
- die Trennung selbständig zu bewerten und zu optimieren
Inhaltsangabe
Anhand von Modellversuchen und von Vorträgen werden die physikalisch-chemischen Grundlagen der Verteilungschromatographie, alternative Trenntechniken in Abhängigkeit von verschiedenen Moleküleigenschaften, sowie typische Anwendungen der Flüssigchromatographie vermittelt. Außerdem wird ein Überblick über den Aufbau und die Funktion eines HPLC-Systems gegeben. Die wichtigsten Parameter und Anforderungen an die Apparatur werden beschrieben, die Wege im System und ihr Einfluss auf die analytische Trennung aufgezeigt. Im Mittelpunkt stehen hierbei die folgenden Gerätekomponenten: Pumpsystem (Hochdruck, Niederdruck, Eluenten, Gradiententechnik), Säulen und Säulenmaterial (Eigenschaften, Einsatzgebiete), Aufgabesysteme und Nachweissysteme (UV/VIS, Fluoreszenz, RI, Leitfähigkeit).
Eine Einführung in die Auswertung von Chromatogrammen (Basislinie, Retention, Peakparameter, Kapazitätsfaktoren) schließt den theoretischen Teil des Kurses ab.
Im praktischen Teil des Kurses werden alle Schritte einer „Reversed Phased“-HPLC an Beispielen besprochen und demonstriert. Jeder Kursteilnehmer führt die Versuche in 2-3er Gruppen selbständig durch und wertet die Versuchsergebnisse unter Anleitung aus. Wichtige Parameter zur Optimierung werden in Übungsbeispielen getestet. Die Kursteilnehmer erhalten ein Skript mit ausführlicher Anleitung zur Durchführung der Versuche.
Achtung! Anmeldeschluss für diesen Kurs ist der 20. April 2012.
